(Flow Cytometry, FCM) adalah penganalisa sel yang mengukur intensitas fluoresensi penanda sel yang diwarnai. Ini adalah teknologi berteknologi tinggi yang dikembangkan berdasarkan analisis dan penyortiran sel tunggal. Ini dapat dengan cepat mengukur dan mengklasifikasikan ukuran, struktur internal, DNA, RNA, protein, antigen dan sifat fisik atau kimia lainnya dari sel, dan dapat didasarkan pada pengumpulan klasifikasi ini.
Flow cytometer terutama terdiri dari lima bagian berikut:
1 Ruang Aliran dan Sistem Fluidics
2 Sumber Sumber Cahaya Laser dan Sistem Pembentukan Balok
3 sistem optik
4 Elektronik, Penyimpanan, Tampilan dan Sistem Analisis
5 Sistem Penyortiran Sel
Di antara mereka, eksitasi laser dalam sumber cahaya laser dan sistem pembentukan balok adalah pengukuran utama sinyal fluoresensi dalam flow cytometry. Intensitas cahaya eksitasi dan waktu paparan terkait dengan intensitas sinyal fluoresensi. Laser adalah sumber cahaya yang koheren yang dapat memberikan panjang gelombang tunggal, intensitas tinggi, dan iluminasi stabilitas tinggi. Ini adalah sumber cahaya eksitasi yang ideal untuk memenuhi persyaratan ini.
Ada dua lensa silinder antara sumber laser dan ruang aliran. Lensa ini memfokuskan sinar laser dengan penampang melingkar yang dipancarkan dari sumber laser ke dalam balok elips dengan penampang yang lebih kecil (22 μm × 66 μm). Energi laser dalam balok elips ini didistribusikan sesuai dengan distribusi normal, memastikan intensitas penerangan yang konsisten untuk sel yang melewati area deteksi laser. Di sisi lain, sistem optik terdiri dari beberapa set lensa, lubang kecil, dan filter, yang dapat dibagi secara kasar menjadi dua kelompok: hulu dan hilir ruang aliran.
Sistem optik di depan ruang aliran terdiri dari lensa dan lubang jarum. Fungsi utama lensa dan lubang jarum (biasanya dua lensa dan lubang jarum) adalah untuk memfokuskan balok laser dengan penampang melingkar yang dipancarkan oleh sumber laser ke dalam balok elips dengan penampang yang lebih kecil. Ini mendistribusikan energi laser sesuai dengan distribusi normal, memastikan intensitas penerangan yang konsisten untuk sel -sel di seluruh area deteksi laser dan meminimalkan gangguan dari cahaya liar.
Ada tiga jenis filter utama:
1: Long Pass Filter (LPF) - Hanya memungkinkan cahaya dengan panjang gelombang lebih tinggi dari nilai spesifik untuk dilewati.
2: Filter pendek -pass (SPF) - Hanya memungkinkan cahaya dengan panjang gelombang di bawah nilai spesifik untuk dilewati.
3: Filter Bandpass (BPF) - Hanya memungkinkan cahaya dalam rentang panjang gelombang tertentu untuk dilewati.
Kombinasi filter yang berbeda dapat mengarahkan sinyal fluoresensi pada panjang gelombang yang berbeda ke tabung photomultiplier individu (PMT). Misalnya, filter untuk mendeteksi fluoresensi hijau (FITC) di depan PMT adalah LPF550 dan BPF525. Filter yang digunakan untuk mendeteksi fluoresensi oranye-merah (PE) di depan PMT adalah LPF600 dan BPF575. Filter untuk mendeteksi fluoresensi merah (CY5) di depan PMT adalah LPF650 dan BPF675.
Flow cytometry terutama digunakan untuk penyortiran sel. Dengan kemajuan teknologi komputer, pengembangan imunologi dan penemuan teknologi antibodi monoklonal, penerapan biologi, kedokteran, farmasi, dan bidang lainnya menjadi semakin luas. Aplikasi ini meliputi analisis dinamika sel, apoptosis sel, pengetikan sel, diagnosis tumor, analisis kemanjuran obat, dll.
Waktu posting: Sep-21-2023
