(Flow cytometry, FCM) adalah penganalisis sel yang mengukur intensitas fluoresensi penanda sel yang diwarnai. Ini adalah teknologi berteknologi tinggi yang dikembangkan berdasarkan analisis dan penyortiran sel tunggal. Ia dapat dengan cepat mengukur dan mengklasifikasikan ukuran, struktur internal, DNA, RNA, protein, antigen, dan sifat fisik atau kimia sel lainnya, dan dapat didasarkan pada kumpulan klasifikasi ini.
Flow cytometer terutama terdiri dari lima bagian berikut:
1 Ruang aliran dan sistem fluida
2 Sumber cahaya laser dan sistem pembentuk sinar
3 Sistem optik
4 Sistem elektronik, penyimpanan, tampilan dan analisis
5 Sistem penyortiran sel
Diantaranya, eksitasi laser pada sumber cahaya laser dan sistem pembentuk sinar merupakan pengukuran utama sinyal fluoresensi dalam flow cytometry. Intensitas cahaya eksitasi dan waktu pemaparan berhubungan dengan intensitas sinyal fluoresensi. Laser adalah sumber cahaya koheren yang dapat memberikan penerangan dengan panjang gelombang tunggal, intensitas tinggi, dan stabilitas tinggi. Ini adalah sumber cahaya eksitasi yang ideal untuk memenuhi persyaratan ini.
Ada dua lensa silinder antara sumber laser dan ruang aliran. Lensa ini memfokuskan sinar laser dengan penampang melingkar yang dipancarkan dari sumber laser menjadi sinar elips dengan penampang lebih kecil (22 μm × 66 μm). Energi laser dalam sinar elips ini didistribusikan sesuai dengan distribusi normal, memastikan intensitas penerangan yang konsisten untuk sel yang melewati area deteksi laser. Di sisi lain, sistem optik terdiri dari beberapa set lensa, lubang kecil, dan filter, yang secara kasar dapat dibagi menjadi dua kelompok: ruang aliran hulu dan hilir.
Sistem optik di depan ruang aliran terdiri dari lensa dan lubang jarum. Fungsi utama lensa dan lubang jarum (biasanya dua lensa dan satu lubang jarum) adalah untuk memfokuskan sinar laser dengan penampang melingkar yang dipancarkan sumber laser menjadi sinar elips dengan penampang lebih kecil. Hal ini mendistribusikan energi laser sesuai dengan distribusi normal, memastikan intensitas pencahayaan yang konsisten untuk sel di seluruh area deteksi laser dan meminimalkan interferensi dari cahaya yang menyimpang.
Ada tiga jenis filter utama:
1: Filter lolos panjang (LPF) - hanya memungkinkan cahaya dengan panjang gelombang lebih tinggi dari nilai tertentu untuk melewatinya.
2: Filter short-pass (SPF) - hanya memungkinkan cahaya dengan panjang gelombang di bawah nilai tertentu untuk melewatinya.
3: Filter bandpass (BPF) - hanya memungkinkan cahaya dalam rentang panjang gelombang tertentu melewatinya.
Kombinasi filter yang berbeda dapat mengarahkan sinyal fluoresensi pada panjang gelombang berbeda ke masing-masing tabung pengganda foto (PMT). Misalnya filter untuk mendeteksi fluoresensi hijau (FITC) di depan PMT adalah LPF550 dan BPF525. Filter yang digunakan untuk mendeteksi fluoresensi oranye-merah (PE) di depan PMT adalah LPF600 dan BPF575. Filter untuk mendeteksi fluoresensi merah (CY5) di depan PMT adalah LPF650 dan BPF675.
Flow cytometry terutama digunakan untuk penyortiran sel. Dengan kemajuan teknologi komputer, perkembangan imunologi dan penemuan teknologi antibodi monoklonal, penerapannya dalam biologi, kedokteran, farmasi dan bidang lainnya semakin meluas. Aplikasi ini meliputi analisis dinamika sel, apoptosis sel, pengetikan sel, diagnosis tumor, analisis kemanjuran obat, dll.
Waktu posting: 21 Sep-2023
