(Flow cytometry, FCM) adalah alat analisis sel yang mengukur intensitas fluoresensi penanda sel yang diwarnai. Ini adalah teknologi canggih yang dikembangkan berdasarkan analisis dan penyortiran sel tunggal. Alat ini dapat dengan cepat mengukur dan mengklasifikasikan ukuran, struktur internal, DNA, RNA, protein, antigen, dan sifat fisik atau kimia sel lainnya, dan dapat didasarkan pada kumpulan klasifikasi ini.
Flow cytometer terutama terdiri dari lima bagian berikut:
1 Ruang aliran dan sistem fluida
2 Sumber cahaya laser dan sistem pembentuk sinar
3 Sistem optik
4 Sistem elektronik, penyimpanan, tampilan dan analisis
5 Sistem penyortiran sel
Di antara semuanya, eksitasi laser dalam sumber cahaya laser dan sistem pembentuk berkas merupakan pengukuran utama sinyal fluoresensi dalam flow cytometry. Intensitas cahaya eksitasi dan waktu pencahayaan terkait dengan intensitas sinyal fluoresensi. Laser merupakan sumber cahaya koheren yang dapat memberikan penerangan dengan panjang gelombang tunggal, intensitas tinggi, dan stabilitas tinggi. Laser merupakan sumber cahaya eksitasi yang ideal untuk memenuhi persyaratan ini.
Terdapat dua lensa silinder antara sumber laser dan ruang aliran. Lensa ini memfokuskan sinar laser dengan penampang melingkar yang dipancarkan dari sumber laser menjadi sinar elips dengan penampang yang lebih kecil (22 μm × 66 μm). Energi laser dalam sinar elips ini didistribusikan menurut distribusi normal, yang memastikan intensitas iluminasi yang konsisten untuk sel yang melewati area deteksi laser. Di sisi lain, sistem optik terdiri dari beberapa set lensa, lubang jarum, dan filter, yang secara kasar dapat dibagi menjadi dua kelompok: hulu dan hilir ruang aliran.
Sistem optik di depan ruang aliran terdiri dari lensa dan lubang jarum. Fungsi utama lensa dan lubang jarum (biasanya dua lensa dan satu lubang jarum) adalah untuk memfokuskan sinar laser dengan penampang melingkar yang dipancarkan oleh sumber laser menjadi sinar elips dengan penampang yang lebih kecil. Ini mendistribusikan energi laser sesuai dengan distribusi normal, memastikan intensitas iluminasi yang konsisten untuk sel-sel di seluruh area deteksi laser dan meminimalkan gangguan dari cahaya yang menyimpang.
Ada tiga jenis filter utama:
1: Filter lolos panjang (LPF) - hanya memungkinkan cahaya dengan panjang gelombang lebih tinggi dari nilai tertentu untuk melewatinya.
2: Filter lolos pendek (SPF) - hanya memungkinkan cahaya dengan panjang gelombang di bawah nilai tertentu untuk melewatinya.
3: Filter lolos pita (BPF) - hanya memperbolehkan cahaya pada rentang panjang gelombang tertentu untuk melewatinya.
Kombinasi filter yang berbeda dapat mengarahkan sinyal fluoresensi pada panjang gelombang yang berbeda ke masing-masing tabung pengganda foto (PMT). Misalnya, filter untuk mendeteksi fluoresensi hijau (FITC) di depan PMT adalah LPF550 dan BPF525. Filter yang digunakan untuk mendeteksi fluoresensi oranye-merah (PE) di depan PMT adalah LPF600 dan BPF575. Filter untuk mendeteksi fluoresensi merah (CY5) di depan PMT adalah LPF650 dan BPF675.
Flow cytometry terutama digunakan untuk penyortiran sel. Dengan kemajuan teknologi komputer, pengembangan imunologi, dan penemuan teknologi antibodi monoklonal, aplikasinya dalam bidang biologi, kedokteran, farmasi, dan bidang lainnya menjadi semakin meluas. Aplikasi ini meliputi analisis dinamika sel, apoptosis sel, pengetikan sel, diagnosis tumor, analisis khasiat obat, dll.
Waktu posting: 21-Sep-2023
